外泌體RNA研究的正確打開方式外泌體中有許多貨物，包含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖、代謝物和核酸等，從論文發(fā)表數(shù)量統(tǒng)計(jì)來(lái)看，外泌體發(fā)揮功能的分子機(jī)制研究中RNA占比是比較高的。然而外泌體與組織或細(xì)胞RNA相比，在提取和質(zhì)控上差異較大，不能延用目前主流的產(chǎn)品和技術(shù)；同時(shí)，外泌體RNA質(zhì)量控制等也缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化方案，這些因素將阻礙外泌體RNA的研究。外泌體與細(xì)胞RNA相比，有一些差異：1.有來(lái)自供體細(xì)胞或周圍環(huán)境RNA的污染；2.外泌體RNA非常微量；3.外泌體RNA中小RNA含量比較高；4.常規(guī)的RNA質(zhì)控方法不適用。綜上，對(duì)外泌體RNA研究人員，需要選擇種高特異、高回收的外泌體分離或RNA提取方法，配合嚴(yán)謹(jǐn)?shù)耐饷隗wRNA質(zhì)控方法，才能呈現(xiàn)出良好的、準(zhǔn)確的、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯繑?shù)據(jù)和科學(xué)結(jié)論。針對(duì)以上問(wèn)題，維思克思推薦使用外泌體RNA提取試劑盒（WSR0004-3）、氯仿替代物（WZ13）、外泌體RNA質(zhì)控試劑盒（WSR0013-1）、外泌體RNA定量試劑盒（WSR0039）。外泌體研究工具適配多種檢測(cè)設(shè)備，無(wú)需專門的儀器，降低設(shè)備投入。維思克思生物科技細(xì)胞外囊泡靠譜供應(yīng)商

氯仿買不到？維思克思包有的Trizol法提取RNA是生物實(shí)驗(yàn)中常用的RNA提取方法，然而使用該方法也伴隨著不少困擾。比如，氯仿屬于管制試劑，難以購(gòu)買！比如，氯仿屬于劇毒試劑，使用時(shí)氣味十分難聞！如果你也遇到以上問(wèn)題，為什么不選擇一款更安全、更環(huán)保、使用效果和氯仿相同的氯仿替代物呢？產(chǎn)品特點(diǎn)：安全環(huán)保，購(gòu)買方便；傳統(tǒng)抽提試劑氯仿屬于危險(xiǎn)化學(xué)品，可引起急性中毒以及致。本產(chǎn)品與氯仿相比毒性更小，更安全、環(huán)保；分層效果明顯，本產(chǎn)品有更強(qiáng)的疏水性，水相分層更為明顯，易于吸取，手殘黨友好；RNA質(zhì)量和得率無(wú)差別，提取出的RNA得率及質(zhì)量與氯仿提取出的五明顯差異，可完全替代氯仿；用量小，一瓶更耐用，相較于氯仿，本品抽提RNA時(shí)，操作步驟相同，但用量為氯仿的一半，更耐用；適用范圍廣，可適用于各種動(dòng)植物細(xì)胞、組織以及微生物樣本的RNA提取。產(chǎn)品信息：RNAExtractionAgent（WZ13）。醫(yī)藥研發(fā)用Exosome廠家批發(fā)外泌體研究工具小批量試用裝供應(yīng)，適合前期方法學(xué)驗(yàn)證，降低試錯(cuò)成本。

外泌體研究常見問(wèn)題解答61.如何鑒定提取出來(lái)的外泌體？根據(jù)MISEV2023，鑒定外泌體首先需要通過(guò)WB來(lái)鑒定細(xì)胞外囊泡的標(biāo)志蛋白是否存在于樣品中，通過(guò)電子顯微鏡來(lái)觀察樣品中細(xì)胞外囊泡的形態(tài)特征，通過(guò)NTA等手段來(lái)分析樣品中細(xì)胞外囊泡的群體特征（粒子濃度、直徑分布等）。一般從外泌體形態(tài)、外泌體粒徑和外泌體標(biāo)志物來(lái)鑒定。（1）鑒定外泌體形態(tài)：通常使用透射電鏡檢測(cè)（TEM）；（2）鑒定外泌體粒徑（大小）和濃度：可以使用納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、納米庫(kù)爾特粒度儀檢測(cè)；（3）鑒定動(dòng)物細(xì)胞外泌體標(biāo)志物：通常使用WB檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101、Alix等），按國(guó)際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)的建議為檢測(cè)3個(gè)陽(yáng)性（一般選擇2個(gè)表面標(biāo)志，1個(gè)內(nèi)部標(biāo)志）和1個(gè)陰性指標(biāo)（Calnexin或GM130）。

外泌體樣本量太大怎么辦？外泌體來(lái)源，幾乎所有細(xì)胞都可以分泌外泌體。在科研中，如何處理大體積外泌體樣本是眾多研究者都覺得十分棘手的問(wèn)題。目前，常用的分離手段包括超速離心法、尺寸排阻法、沉淀法以及免疫親和法。然而這些分離方法要么只適用于小體積微量樣本，要么就是對(duì)儀器要求高、操作復(fù)雜。與各位研究者分享維思克思的大體積樣本處理經(jīng)驗(yàn)，愿能為各位研究者提供思路。1.外泌體濃縮試劑。外泌體濃縮試劑可用于大體積外泌體樣本的處理，可以高通量、快速實(shí)現(xiàn)大體積外泌體樣本（如細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液等）的濃縮，濃縮后的樣本后處理后可進(jìn)行外泌體的分離純化、RNA提取、蛋白提取等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.超濾管超濾。超濾濃縮是一種常用的分離技術(shù)，利用超濾膜對(duì)組分進(jìn)行分離。溶液通過(guò)超濾膜，利用膜孔的大小選擇性，將分子量較大的物質(zhì)過(guò)濾出來(lái)，而將分子量較小的物質(zhì)通過(guò)膜孔。以上大體積外泌體樣本處理工具，維思克思均有提供。外泌體濃縮試劑以及超濾管在處理大體積樣本上具有突出優(yōu)勢(shì)。尤其是外泌體濃縮試劑，操作簡(jiǎn)便，濃縮倍數(shù)高，實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)有較好的評(píng)價(jià)，推薦指數(shù)較高。濃縮后的外泌體分離純化，維思克思產(chǎn)品線也非常齊全，包括磁珠法、SEC法等。外泌體研究工具規(guī)模化生產(chǎn)儲(chǔ)備，保障供應(yīng)穩(wěn)定，應(yīng)對(duì)突發(fā)實(shí)驗(yàn)需求。

外泌體研究常見問(wèn)題解答145.外泌體RT-qPCR實(shí)驗(yàn)是選擇哪個(gè)靶標(biāo)作為內(nèi)參？外泌體沒有公認(rèn)內(nèi)參，理由如上。常規(guī)內(nèi)參基因在外泌體中表達(dá)量甚至可能比目標(biāo)基因還低。外參是在沒有合適內(nèi)參的情況下的替代物。miRNA檢測(cè)外參是化學(xué)合成的線蟲短片段單鏈RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均無(wú)同源片段，比較大限度降低了對(duì)定量實(shí)驗(yàn)造成的干擾。6.外泌體SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)，樣本量有什么要求？腫瘤細(xì)胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量。某些細(xì)胞（如懸浮細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等）中外泌體含量比較低，建議使用100mL的初始樣品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA，才可以用于SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)。7.如何確保外泌體RT-qPCR和SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)的成功率？為了保證轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)的成功率，建議對(duì)提取的外泌體RNA進(jìn)行質(zhì)控，確保RNA質(zhì)量。如檢測(cè)RNA的濃度、純度和片段分布等，但由于外泌體RNA含量較低，建議使用商業(yè)的外泌體RNA質(zhì)控試劑盒對(duì)RNA質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估。外泌體研究工具成熟技術(shù)體系，快速解決實(shí)驗(yàn)難題，降低研發(fā)周期成本。大規(guī)模細(xì)胞外囊泡鑒定

外泌體研究工具簡(jiǎn)易操作設(shè)計(jì)，無(wú)需復(fù)雜設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)室入門成本。維思克思生物科技細(xì)胞外囊泡靠譜供應(yīng)商

外泌體研究常見問(wèn)題解答51.外泌體樣品如何保存？長(zhǎng)期保存，置于-80℃。凍存前，離心去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片，再將樣品分裝保存在-80℃。如果條件允許，建議用新鮮樣品進(jìn)行外泌體的分離和后續(xù)實(shí)驗(yàn)。短期保存（1-2天），置于4℃（確保無(wú)菌）。2.分離的外泌體如何保存？（1）使用低吸附離心管或凍存管，減少外泌體粘附。（2）對(duì)于短期而言，外泌體可以在4°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)1周。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，外泌體可以在-20°C或-80°C下儲(chǔ)存。當(dāng)長(zhǎng)期儲(chǔ)存外泌體時(shí)，重要的是要考慮它們是否需要多次解凍。如果需要多次應(yīng)用（因此需要多次解凍）進(jìn)行分析，我們建議將外泌體懸浮液等分到多個(gè)試管中，以便每個(gè)試管只經(jīng)歷一個(gè)冷凍/解凍循環(huán)。多次凍融循環(huán)會(huì)對(duì)外泌體造成損傷并減少其數(shù)量。維思克思生物科技細(xì)胞外囊泡靠譜供應(yīng)商

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