外泌體研究常見問題解答11.外泌體是什么？通常，外泌體被定義為約1.13-1.19g/mL的囊泡（基于密度梯度離心），預期尺寸為30–150nm（基于電鏡分析）。由活細胞分泌到細胞外環(huán)境的膜性小囊泡，是細胞間信息傳遞的重要載體，參與細胞間相互作用。幾乎所有類型的細胞，都可以產(chǎn)生并釋放外泌體。根據(jù)不同生物來源分類，外泌體分為動物細胞外泌體、植物外泌體、微生物外泌體。動物細胞來源的外泌體也可以通過其表面蛋白標記物來定義和鑒定，這些標記物包括：四跨肽（CD63、CD81、CD9）和其他類似ALIX、TSG101等標記物。目前沒有合適的工具，也沒有足夠的知識來對外泌體做出明確而簡單的定義，將其與其他微/納米囊泡區(qū)分開。外泌體研究工具多功能檢測模塊，一項試劑多指標分析，提升性價比。HEK293胞外囊泡

外泌體研究常見問題解答83.外泌體是如何可視化和/或計數(shù)的？外泌體太?。?0–150nm），無法使用常規(guī)顯微鏡觀察，因為這于大小至少為幾微米的物體。光學顯微鏡的分辨率太低，無法觀察外泌體。外泌體大小分布的典型分析方法包括納米粒子跟蹤分析（NTA）、納米流式和電子顯微鏡。盡管在方法上非常不同，但這些技術(shù)都允許你研究尺寸低至10納米的納米顆粒。要確定樣本中外泌體的濃度，可以使用NTA、納米流式。它們通過不同的原理對納米顆粒（10–1000nm）進行計數(shù)和粒徑測定。NTA可能是獲得溶液中顆粒平均尺寸和濃度信息的常用方法。然而，這種方法無法區(qū)分大小相同的囊泡和蛋白質(zhì)聚集體。因此，我們建議將這種方法與顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，以驗證膜的存在。4.外泌體電鏡是不是一定要有膜結(jié)構(gòu)，無膜結(jié)構(gòu)的球體是外泌體嗎？負染電鏡結(jié)果中外泌體的形態(tài)肯定是那種明顯的茶托樣或者大餅樣的！邊緣有一圈略微更明亮的亮圈。如果你打到的結(jié)構(gòu)是沒有膜結(jié)構(gòu)的圓球形，那么您很可能看到了脂蛋白顆?；蛘弑F的蛋白質(zhì)。大體積上清ExosomeCRO外泌體研究工具標準化套裝，涵蓋提取到檢測全流程，提升實驗效率。

外泌體的保存是否重要？在外泌體研究中，儲存穩(wěn)定性是一直困擾廣大科研工作者的難題。目前外泌體一般在PBS中，置于-80℃分裝凍存，但隨著凍存時間和凍融次數(shù)的增加，將會嚴重影響外泌體的活性、完整性、貨物含量等。針對上述難點，維思克思開發(fā)出外泌體的凍存保存液，直接混入外泌體樣本中，置于-20℃、-80℃凍存，可明顯改善儲存樣品的短期和長期穩(wěn)定性。產(chǎn)品特點：操作簡便，可直接混入外泌體樣本中，無需過多操作。保護效果好，使用后外泌體生物活性穩(wěn)定，多次凍融后外泌體顆粒數(shù)、表面標志物蛋白均無明顯差異。適用樣本范圍廣，可適用于所有外泌體樣本（包括植物、動物、微生物、人來源外泌體）。產(chǎn)品信息：WisExoExosomeProtector（WSR0020）

磁珠法外泌體RNA提取試劑盒。開發(fā)一種在質(zhì)量和得率上合格的外泌體RNA提取方法對外泌體研究非常重要，許多實驗室已努力開發(fā)這種方法，采用了各種方法，均可供研究人員使用，具有不同程度的實用性。例如，使用基于大小的過濾器開發(fā)的試劑盒缺乏外泌體部分的特異性；與過濾器尺寸匹配的任何顆粒都將被其保留，包括細胞碎片、蛋白復合物，甚至血小板和淋巴細胞，這取決于過濾器的尺寸?；诰酆衔锏某恋砗褪褂秒x液鹽的直接裂解也缺乏對囊泡的特異性。我們開發(fā)了一種基于磁珠的外泌體RNA提取方法，該方法可通過簡單且可重復的工作流程分離外泌體并從血漿和血清等樣本中提取RNA。與超速離心相比，這種方法可從血漿樣本中捕獲近100%RNA，RNA產(chǎn)量優(yōu)于超速離心法。MicroExosomeTotalRNAExtractionKit（WSR0004）分離出的RNA純度更高、收率相同或更多，對提取的外泌體RNA特異性高于非外泌體RNA。磁珠法能夠處理更多的樣本量，從而能夠檢測血清或血漿中的低豐度轉(zhuǎn)錄本。提供了一種更快、更標準化的方法來從血清和血漿等生物流體中的外泌體獲得可靠的高質(zhì)量RNA。外泌體研究工具長效穩(wěn)定配方，延長有效期，減少試劑過期浪費。

如何提高細胞外囊泡產(chǎn)量？盡管基于外泌體具有巨大潛力，但傳統(tǒng)生產(chǎn)方式產(chǎn)量低和放大困難等特點，嚴重制約了外泌體的臨床應用轉(zhuǎn)化。維思克思總結(jié)了提高外泌體產(chǎn)量的方法，包括物理和化學刺激、增加鈣離子內(nèi)流、細胞骨架固定、藥物刺激以及特定基因的過表達等，可有效提高外泌體表達量。具體有哪些方法可以提高細胞外囊泡產(chǎn)量呢？01培養(yǎng)條件。采用3D培養(yǎng)替代傳統(tǒng)2D培養(yǎng)可提高外泌體產(chǎn)量。缺氧可刺激細胞分泌外泌體。此外，適度降低pH值可顯著提高外泌體的表達量。02物理刺激。采用物理刺激的方法可明顯增加外泌體的產(chǎn)量。常用物理刺激包括：剪切力、周期性張力、聲音和電場刺激等。03分子干預。一般來說，細胞處于應激狀態(tài)下會增加外泌體的分泌。04誘導表達。脂質(zhì)體通過內(nèi)吞作用刺激細胞活性，明顯增加外泌體分泌量。磁性納米微粒可刺激細胞的內(nèi)吞功能，可增加外泌體表達。以上這些策略均為來自特定細胞和特定條件下所得到的結(jié)果。想跳過繁瑣的優(yōu)化過程，直接使用上高產(chǎn)又穩(wěn)定的外泌體培養(yǎng)基嗎？維思克思推出的外泌體培養(yǎng)基(WSC0008)和無外泌體血清可滿足您的要求！外泌體研究工具自動化操作兼容，適配實驗室自動化系統(tǒng)，提升工作效率。高效sEVsNTA粒徑檢測

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你分離的血清/血漿外泌體真的干凈嗎？對于血清和血漿等復雜樣本，分離外泌體是十分棘手的。主要原因是血液樣本的成分比較復雜，很容易造成細胞外囊泡的污染。脂蛋白顆粒就是常見細胞外囊泡難以分離的污染物之一。外泌體與脂蛋白的體積、密度十分相近，以至于很多傳統(tǒng)的方法都不能把他們完全分離。1.密度梯度超速離心高密度脂蛋白的密度與細胞外囊泡密度相近，所以它是密度梯度離心主要的污染脂蛋白。低密度脂蛋白雖密度低于EV，但離心的方法還不足以完全將二者分開。因此使用密度梯度超速離心的方式可能無法完全排除脂蛋白污染的可能性。2.分子排阻法（SEC）SEC是根據(jù)粒徑大小進行外泌體分離。脂蛋白與外泌體尺寸相近，尤其是極低密度脂蛋白與乳糜微粒。因此，也無法通過分子排阻法將脂蛋白與細胞外囊泡完全分離。3.超速離心法在粒徑和密度相差不大的情況下，顆粒的沉降速度也相差不大。尤其是脂蛋白顆粒數(shù)遠超于外泌體時，被稱為金標準的超離法也稍顯不足了?；诖?，維思克思推薦選擇磁珠法（WSR0002-2），是基于自主研發(fā)的均相液體磁珠，可特異性捕獲外泌體而不吸附雜質(zhì)，實現(xiàn)高純度外泌體分離。HEK293胞外囊泡

維思克思生物科技(武漢)有限公司匯集了大量的優(yōu)秀人才，集企業(yè)奇思，創(chuàng)經(jīng)濟奇跡，一群有夢想有朝氣的團隊不斷在前進的道路上開創(chuàng)新天地，繪畫新藍圖，在湖北省等地區(qū)的機械及行業(yè)設備中始終保持良好的信譽，信奉著“爭取每一個客戶不容易，失去每一個用戶很簡單”的理念，市場是企業(yè)的方向，質(zhì)量是企業(yè)的生命，在公司有效方針的領導下，全體上下，團結(jié)一致，共同進退，**協(xié)力把各方面工作做得更好，努力開創(chuàng)工作的新局面，公司的新高度，未來維思克思生物科技供應和您一起奔向更美好的未來，即使現(xiàn)在有一點小小的成績，也不足以驕傲，過去的種種都已成為昨日我們只有總結(jié)經(jīng)驗，才能繼續(xù)上路，讓我們一起點燃新的希望，放飛新的夢想！