外泌體研究常見問題解答145.外泌體RT-qPCR實驗是選擇哪個靶標(biāo)作為內(nèi)參？外泌體沒有公認內(nèi)參，理由如上。常規(guī)內(nèi)參基因在外泌體中表達量甚至可能比目標(biāo)基因還低。外參是在沒有合適內(nèi)參的情況下的替代物。miRNA檢測外參是化學(xué)合成的線蟲短片段單鏈RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均無同源片段，比較大限度降低了對定量實驗造成的干擾。6.外泌體SmallRNA-seq實驗，樣本量有什么要求？腫瘤細胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量。某些細胞（如懸浮細胞、干細胞、神經(jīng)細胞等）中外泌體含量比較低，建議使用100mL的初始樣品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA，才可以用于SmallRNA-seq實驗。7.如何確保外泌體RT-qPCR和SmallRNA-seq實驗的成功率？為了保證轉(zhuǎn)錄組實驗的成功率，建議對提取的外泌體RNA進行質(zhì)控，確保RNA質(zhì)量。如檢測RNA的濃度、純度和片段分布等，但由于外泌體RNA含量較低，建議使用商業(yè)的外泌體RNA質(zhì)控試劑盒對RNA質(zhì)量進行評估。外泌體研究工具批量訂單快速交付，減少等待時間，保障研究進度?？蒲杏冒饽遗輳S家定制

外泌體研究常見問題解答61.如何鑒定提取出來的外泌體？根據(jù)MISEV2023，鑒定外泌體首先需要通過WB來鑒定細胞外囊泡的標(biāo)志蛋白是否存在于樣品中，通過電子顯微鏡來觀察樣品中細胞外囊泡的形態(tài)特征，通過NTA等手段來分析樣品中細胞外囊泡的群體特征（粒子濃度、直徑分布等）。一般從外泌體形態(tài)、外泌體粒徑和外泌體標(biāo)志物來鑒定。（1）鑒定外泌體形態(tài)：通常使用透射電鏡檢測（TEM）；（2）鑒定外泌體粒徑（大?。┖蜐舛龋嚎梢允褂眉{米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、納米庫爾特粒度儀檢測；（3）鑒定動物細胞外泌體標(biāo)志物：通常使用WB檢測外泌體標(biāo)志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101、Alix等），按國際細胞外囊泡協(xié)會的建議為檢測3個陽性（一般選擇2個表面標(biāo)志，1個內(nèi)部標(biāo)志）和1個陰性指標(biāo)（Calnexin或GM130）。檸檬細胞外囊泡凍干外泌體研究工具標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，新手也能快速上手，降低培訓(xùn)成本。

大體積外泌體樣本量處理方案大體積外泌體樣本在濃縮后根據(jù)不同應(yīng)用，銜接不同的外泌體分離純化方法，見下文。01外泌體分離純化對于外泌體的分離純化，市面上已有許多方法。維思克思總結(jié)出常用、簡便、效果比較好的三種方法。SEC重力柱基于分子排阻色譜原理，根據(jù)被分離組分分子大小差異進行外泌體的分離。具有操作簡便、高純度和高回收率等優(yōu)點，特別適用于大體積樣本中的外泌體分離。SEC離心柱是離心柱式的外泌體分離產(chǎn)品，離心柱中裝填的介質(zhì)能無差別的吸附雜質(zhì)而不結(jié)合外泌體，實現(xiàn)超快速、高收率的外泌體分離。磁珠法外泌體分離試劑盒能特異性捕獲外泌體而不吸附雜質(zhì)，實現(xiàn)高純度、高回收率外泌體分離。具有操作簡便、高純度和高回收率等優(yōu)點，特別適用于血漿、血清等復(fù)雜樣本中的外泌體分離。02外泌體RNA提取在外泌體RNA提取步驟中，常用的是磁珠法和沉淀法。磁珠法外泌體總RNA提取試劑盒能特異性捕獲外泌體，實現(xiàn)高純度、高回收率提取，特別適用于血漿、血清等復(fù)雜樣本RNA提取。沉淀法外泌體總RNA提取試劑盒，于外泌體微量RNA的提取，具有提取效率高、提取的RNA種類多、回收的miRNA含量高等特點。

氯仿買不到？維思克思包有的Trizol法提取RNA是生物實驗中常用的RNA提取方法，然而使用該方法也伴隨著不少困擾。比如，氯仿屬于管制試劑，難以購買！比如，氯仿屬于劇毒試劑，使用時氣味十分難聞！如果你也遇到以上問題，為什么不選擇一款更安全、更環(huán)保、使用效果和氯仿相同的氯仿替代物呢？產(chǎn)品特點：安全環(huán)保，購買方便；傳統(tǒng)抽提試劑氯仿屬于危險化學(xué)品，可引起急性中毒以及致。本產(chǎn)品與氯仿相比毒性更小，更安全、環(huán)保；分層效果明顯，本產(chǎn)品有更強的疏水性，水相分層更為明顯，易于吸取，手殘黨友好；RNA質(zhì)量和得率無差別，提取出的RNA得率及質(zhì)量與氯仿提取出的五明顯差異，可完全替代氯仿；用量小，一瓶更耐用，相較于氯仿，本品抽提RNA時，操作步驟相同，但用量為氯仿的一半，更耐用；適用范圍廣，可適用于各種動植物細胞、組織以及微生物樣本的RNA提取。產(chǎn)品信息：RNAExtractionAgent（WZ13）。外泌體研究工具低損耗設(shè)計，試劑利用率高，減少實驗成本浪費。

維思克思的外泌體濃縮方案-超濾管02超濾管超濾。超濾濃縮是一種常用的分離技術(shù)，利用超濾膜對組分進行分離。溶液通過超濾膜，利用膜孔的大小選擇性，將分子量較大的物質(zhì)過濾出來，而將分子量較小的物質(zhì)通過膜孔。本產(chǎn)品基于低蛋白吸附的過濾膜，根據(jù)膜的大小規(guī)格以達到樣本濃縮或分離的效果。具有操作簡單，離心時間短，回收率高等特點?？捎糜谏飿悠窛饪s，分離，蛋白除雜等領(lǐng)域。使用方法：1.樣本澄清通過膜過濾樣本，使樣本澄清，去除雜質(zhì)。2.超濾管平衡超濾管中加入適量PBS，在轉(zhuǎn)子中離心。移去裝置底部PBS。3.樣品超濾向超濾管中加入5ml樣品，離心。棄除收集管中液體，回收濃縮樣品。外泌體研究工具原廠直供模式，省去中間商環(huán)節(jié)，保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。臍帶間充質(zhì)細胞外囊泡產(chǎn)品

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外泌體定量和表征。研究外泌體的同行們（包括我）一直被外泌體的定量和表征所困擾，什么樣的外泌體才是好的外泌體呢？是評估其活性？純度？蛋白濃度？還是其他什么指標(biāo)？或者說我們在做實驗時，怎樣對外泌體進行定量呢？這個可以說是進行外泌體實驗的第一步，必須確定外泌體的量，才好判斷實驗變量是否影響外泌體的發(fā)生或者確定下游應(yīng)用實驗的給藥劑量。你們是如何進行定量的呢？目前的外泌體定量方法有以下幾種，分別是：納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、表面標(biāo)志物的ELISA定量試劑盒、BCA或Bradford蛋白定量試劑盒。注：受認知所限，有沒有涵蓋的，歡迎補充。上述外泌體定量方法中，以BCA蛋白濃度測定應(yīng)用的廣，也容易得到（也就是可及性很高）。但是，但是我們分離的外泌體，因獲取樣本的不一致，每種樣本中雜蛋白的含量不盡相同，同時分離方法也不一定相同，這就導(dǎo)致我們很難確定蛋白量與外泌體量的對應(yīng)關(guān)系。所以，我們這些外泌體研究者就在兩難之間不斷橫跳。為了解決這些困境，維思克思生物科技提供了整套外泌體鑒定技術(shù)服務(wù)、外泌體分離、示蹤、保存、游離染料清qing除、蛋白定量、脂質(zhì)定量、核酸定量等系列產(chǎn)品。科研用胞外囊泡廠家定制

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