外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答91.外泌體的分離方法有哪些，哪種更好？分離是進(jìn)行外泌體研究關(guān)鍵的一步，只有選擇了合適的方法才能得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。分離方法包括：超速離心、尺寸排阻、免疫磁珠、聚合物沉淀、親和磁珠/膜等方法。根據(jù)外泌體的大小，密度和表面標(biāo)志物的不同進(jìn)行分離，不同提取外泌體方法優(yōu)劣勢(shì)比較，受限于篇幅，詳細(xì)版請(qǐng)聯(lián)系維思克思生物科技獲取。2.細(xì)胞培養(yǎng)上清中死細(xì)胞對(duì)外泌體分離的影響？在細(xì)胞凋亡/死亡過(guò)程中會(huì)釋放大量Evs，會(huì)混入活細(xì)胞分泌的外泌體中，而目前的外泌體分離方法并不能將兩者區(qū)分開(kāi)來(lái)。所以在收集細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本時(shí)，需要保證細(xì)胞活率應(yīng)不小于95%。3.大體積的樣本類(lèi)型，如何分離外泌體？大體積樣本，如細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液等，可以先濃縮樣本（如超濾或外泌體濃縮試劑等），減少樣本體積，再使用常規(guī)的外泌體分離方法。4.復(fù)雜的樣本類(lèi)型，如何分離得到高純度的外泌體？復(fù)雜的樣本類(lèi)型如血清、血漿、奶制品、腦脊液等，含有很多與外泌體在尺寸和密度接近的雜質(zhì)，常規(guī)的外泌體分離方法難以獲取高純度的外泌體，建議使用親和的外泌體分離方法，如PS親和、免疫親和、膜親和等外泌體分離試劑盒。外泌體研究工具自動(dòng)化數(shù)據(jù)分析兼容，適配主流軟件，提升分析效率。蘋(píng)果胞外囊泡貨源

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答134.當(dāng)我的Westerns似乎不起作用時(shí)，我該怎么辦？這有幾個(gè)典型的原因：（1）添加的樣本量不足。外泌體可能含有相當(dāng)少量的蛋白質(zhì)貨物。對(duì)于初始實(shí)驗(yàn)，我們建議添加盡可能多的樣本。（2）抗體不是比較好的。我們建議測(cè)試2-3家制造商的抗體（如抗CD63或其他外泌體標(biāo)記物），仔細(xì)檢查推薦的濃度。此外，它們比較好是新鮮使用，并且需要妥善儲(chǔ)存。（3）根據(jù)外泌體表面標(biāo)記，某些凝膠條件可能對(duì)靶抗體更為優(yōu)化（例如還原/非還原和變性/非變性）。我們建議與制造商和外泌體社區(qū)核實(shí)您所針對(duì)的特異性標(biāo)記物和您所使用的特異性抗體的推薦條件。（4）一般Westerns技術(shù)。Western可能很棘手，我們建議使用陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行初步測(cè)試，以確保整個(gè)工作流程正常運(yùn)行。任何蛋白質(zhì)或抗體都可以使用，只要它們滿(mǎn)足您需要的條件（例如變性與非變性）。此外，在挑選蛋白質(zhì)時(shí)，盡量避開(kāi)樣本中濃度非常高或非常低的蛋白質(zhì)，以防止印跡過(guò)載或完全沒(méi)有信號(hào)。工程化外泌體miRNA測(cè)序外泌體研究工具高兼容性配方，適配多種樣本類(lèi)型，提升應(yīng)用范圍。

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答11.外泌體是什么？通常，外泌體被定義為約1.13-1.19g/mL的囊泡（基于密度梯度離心），預(yù)期尺寸為30–150nm（基于電鏡分析）。由活細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境的膜性小囊泡，是細(xì)胞間信息傳遞的重要載體，參與細(xì)胞間相互作用。幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞，都可以產(chǎn)生并釋放外泌體。根據(jù)不同生物來(lái)源分類(lèi)，外泌體分為動(dòng)物細(xì)胞外泌體、植物外泌體、微生物外泌體。動(dòng)物細(xì)胞來(lái)源的外泌體也可以通過(guò)其表面蛋白標(biāo)記物來(lái)定義和鑒定，這些標(biāo)記物包括：四跨肽（CD63、CD81、CD9）和其他類(lèi)似ALIX、TSG101等標(biāo)記物。目前沒(méi)有合適的工具，也沒(méi)有足夠的知識(shí)來(lái)對(duì)外泌體做出明確而簡(jiǎn)單的定義，將其與其他微/納米囊泡區(qū)分開(kāi)。

相信大家一直都被一個(gè)問(wèn)題困擾，什么樣的外泌體才是好的外泌體呢？采購(gòu)?fù)饷隗w時(shí)，如何判斷外泌體質(zhì)量？現(xiàn)在，我們對(duì)外泌體供應(yīng)商-維思克思的外泌體WSR0014-1進(jìn)行測(cè)評(píng)。咱們來(lái)看看高質(zhì)量的外泌體到底長(zhǎng)什么樣？一、首先對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定。首先要證明是外泌體，那如何證明呢？一般從三大基礎(chǔ)表征維度進(jìn)行分析：形態(tài)、粒徑分布、外泌體標(biāo)志蛋白。二、確定外泌體顆粒數(shù)與純度。還需另一重要表征維度外泌體的純度。在做實(shí)驗(yàn)時(shí)，怎樣考察純度呢？不同來(lái)源的外泌體，因獲取樣本的不一致，每種樣本中雜蛋白的含量不盡相同，同時(shí)分離方法也不一定相同，這可能導(dǎo)致不一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。外泌體純度表征可以用顆粒數(shù)/蛋白、顆粒數(shù)/RNA、蛋白/脂質(zhì)、脂質(zhì)/RNA等多個(gè)維度來(lái)評(píng)估外泌體純度，避免mian單一方法的局限性。備注：脂質(zhì)濃度用維思克思WSR0028-2測(cè)量；RNA濃度用維思克思WSR0039測(cè)量。三、評(píng)估外泌體的安全性。如果用來(lái)做細(xì)胞或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，外泌體中含有影響細(xì)胞或動(dòng)物的成分，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果將會(huì)令人非常詛喪。這次測(cè)評(píng)將外泌體的安全性指標(biāo)進(jìn)行的評(píng)估，包括內(nèi)外源病毒、細(xì)菌、支原體的檢測(cè)，結(jié)果顯示安全性指標(biāo)全部合格。外泌體研究工具適配多種檢測(cè)設(shè)備，無(wú)需專(zhuān)門(mén)的儀器，降低設(shè)備投入。

外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題解答35.CD9或CD81等是否對(duì)外泌體起源具有特異性？目前，對(duì)于一般的外泌體標(biāo)記物還沒(méi)有達(dá)成共識(shí)。研究界目前的建議是結(jié)合檢測(cè)許多膜結(jié)合或膜相關(guān)蛋白，以驗(yàn)證膜的存在。靶點(diǎn)CD63和CD81存在于許多不同的外泌體制劑中，CD9也是如此。然而，檢測(cè)到至少2種不同的細(xì)胞系釋放CD9陰性的外泌體（Jurkat細(xì)胞和幾種B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）。同樣重要的是，通過(guò)對(duì)已知在ER、高爾基體或細(xì)胞核等隔室中表達(dá)的標(biāo)記物進(jìn)行染色，來(lái)證明不存在污染性囊泡。同樣重要的是，用相同的標(biāo)記物來(lái)表征宿主細(xì)胞。6.外泌體中是否包含DNA？一般認(rèn)為外泌體中不包含DNA，或包含少量線粒體DNA。因?yàn)橥饷隗w在胞質(zhì)中形成與包裹貨物，而在胞質(zhì)中存在少量降解的線粒體DNA。目前有一些研究發(fā)現(xiàn)，在外泌體的表面，稱(chēng)之為“corona”，中文叫“冠“或”暈“，在外泌體分泌到細(xì)胞外后，會(huì)吸附微量的游離DNA。外泌體研究工具標(biāo)準(zhǔn)化套裝，涵蓋提取到檢測(cè)全流程，提升實(shí)驗(yàn)效率。尿液Extracellular Vesicles靶向

外泌體研究工具標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量檢測(cè)，每批次嚴(yán)格質(zhì)控，保障實(shí)驗(yàn)可靠性。蘋(píng)果胞外囊泡貨源

高純度外泌體凍干粉維思克思提供多種外泌體凍干粉，包括不限于來(lái)源于人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體、HEK293外泌體、NK外泌體、牛奶外泌體、植物外泌體等。這些外泌體是通過(guò)切向流過(guò)濾、多種層析技術(shù)等純化方式，經(jīng)優(yōu)化的凍干工藝制得高純度、品質(zhì)優(yōu)良的外泌體。經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)量控制，可用于外泌體常用研究，包括外泌體功能實(shí)驗(yàn)、示蹤、載藥等多種實(shí)驗(yàn)。產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：高純度，純度高達(dá)1E+11Particles/mg（可定制專(zhuān)屬項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)品）。高完整性，本品電鏡視野下，外泌體形態(tài)完整。穩(wěn)定性好，以?xún)龈煞坌问剑?℃保存，有效期2年。質(zhì)檢嚴(yán)格，經(jīng)多項(xiàng)的質(zhì)檢，保證產(chǎn)品質(zhì)量。產(chǎn)品信息：具體外泌體標(biāo)準(zhǔn)品清單請(qǐng)聯(lián)系客服獲取。蘋(píng)果胞外囊泡貨源

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