外泌體研究常見問題解答61.如何鑒定提取出來的外泌體？根據(jù)MISEV2023，鑒定外泌體首先需要通過WB來鑒定細胞外囊泡的標志蛋白是否存在于樣品中，通過電子顯微鏡來觀察樣品中細胞外囊泡的形態(tài)特征，通過NTA等手段來分析樣品中細胞外囊泡的群體特征（粒子濃度、直徑分布等）。一般從外泌體形態(tài)、外泌體粒徑和外泌體標志物來鑒定。（1）鑒定外泌體形態(tài)：通常使用透射電鏡檢測（TEM）；（2）鑒定外泌體粒徑（大?。┖蜐舛龋嚎梢允褂眉{米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、納米庫爾特粒度儀檢測；（3）鑒定動物細胞外泌體標志物：通常使用WB檢測外泌體標志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101、Alix等），按國際細胞外囊泡協(xié)會的建議為檢測3個陽性（一般選擇2個表面標志，1個內(nèi)部標志）和1個陰性指標（Calnexin或GM130）。外泌體研究工具高靈敏度檢測試劑，微量樣本即可分析，減少樣本用量需求。高質量Extracellular Vesicles定制生產(chǎn)

你分離的血清/血漿外泌體真的干凈嗎？對于血清和血漿等復雜樣本，分離外泌體是十分棘手的。主要原因是血液樣本的成分比較復雜，很容易造成細胞外囊泡的污染。脂蛋白顆粒就是常見細胞外囊泡難以分離的污染物之一。外泌體與脂蛋白的體積、密度十分相近，以至于很多傳統(tǒng)的方法都不能把他們完全分離。1.密度梯度超速離心高密度脂蛋白的密度與細胞外囊泡密度相近，所以它是密度梯度離心主要的污染脂蛋白。低密度脂蛋白雖密度低于EV，但離心的方法還不足以完全將二者分開。因此使用密度梯度超速離心的方式可能無法完全排除脂蛋白污染的可能性。2.分子排阻法（SEC）SEC是根據(jù)粒徑大小進行外泌體分離。脂蛋白與外泌體尺寸相近，尤其是極低密度脂蛋白與乳糜微粒。因此，也無法通過分子排阻法將脂蛋白與細胞外囊泡完全分離。3.超速離心法在粒徑和密度相差不大的情況下，顆粒的沉降速度也相差不大。尤其是脂蛋白顆粒數(shù)遠超于外泌體時，被稱為金標準的超離法也稍顯不足了?；诖?，維思克思推薦選擇磁珠法（WSR0002-2），是基于自主研發(fā)的均相液體磁珠，可特異性捕獲外泌體而不吸附雜質，實現(xiàn)高純度外泌體分離。諾獎Extracellular Vesicles廠家定制外泌體研究工具快速復溶設計，減少實驗準備時間，提升操作便捷性。

如何提高細胞外囊泡產(chǎn)量？盡管基于外泌體具有巨大潛力，但傳統(tǒng)生產(chǎn)方式產(chǎn)量低和放大困難等特點，嚴重制約了外泌體的臨床應用轉化。維思克思總結了提高外泌體產(chǎn)量的方法，包括物理和化學刺激、增加鈣離子內(nèi)流、細胞骨架固定、藥物刺激以及特定基因的過表達等，可有效提高外泌體表達量。具體有哪些方法可以提高細胞外囊泡產(chǎn)量呢？01培養(yǎng)條件。采用3D培養(yǎng)替代傳統(tǒng)2D培養(yǎng)可提高外泌體產(chǎn)量。缺氧可刺激細胞分泌外泌體。此外，適度降低pH值可顯著提高外泌體的表達量。02物理刺激。采用物理刺激的方法可明顯增加外泌體的產(chǎn)量。常用物理刺激包括：剪切力、周期性張力、聲音和電場刺激等。03分子干預。一般來說，細胞處于應激狀態(tài)下會增加外泌體的分泌。04誘導表達。脂質體通過內(nèi)吞作用刺激細胞活性，明顯增加外泌體分泌量。磁性納米微?？纱碳ぜ毎膬?nèi)吞功能，可增加外泌體表達。以上這些策略均為來自特定細胞和特定條件下所得到的結果。想跳過繁瑣的優(yōu)化過程，直接使用上高產(chǎn)又穩(wěn)定的外泌體培養(yǎng)基嗎？維思克思推出的外泌體培養(yǎng)基(WSC0008)和無外泌體血清可滿足您的要求！

外泌體表征系列產(chǎn)品線目前外泌體缺乏有效的定量和表征方法，單一的檢測技術都有其局限性。維思克思全新系列產(chǎn)品—外泌體表征與定量試劑盒，該系列產(chǎn)品可對現(xiàn)有單一表征與定量方法進行補充，通過多維度對分離出的外泌體進行評估，使實驗數(shù)據(jù)更加科學、準確。01BCA蛋白定量試劑盒（WSR0022），具有靈敏度高、顯色速度快、線性范圍廣的優(yōu)勢，可高效快速實現(xiàn)蛋白定量。02脂質定量試劑盒(WSR0028/WSR0028-2)，現(xiàn)有的脂質定量方法大都需要昂貴的儀器，本產(chǎn)品可代替大型儀器，實現(xiàn)小成本快速檢測，具有靈敏度高、操作簡便、線性范圍廣等優(yōu)勢。03外泌體RNAQC試劑盒（WSR0013-1），經(jīng)大量研究分析，篩選出2個陽性外泌體RNA靶標和1個陰性靶標，用于表征RNA質量。04外泌體蛋白標志物鑒定試劑盒（WSR0030），針對外泌體標志蛋白CD9、CD81、TSG101、Calnexin檢測而研發(fā)的一款方便高效的試劑盒產(chǎn)品，可監(jiān)測實驗體系并準確檢測到外泌體中的以上蛋白。05外泌體RNA定量試劑盒（WSR0039），檢測線性范圍是0-25ng，比較低檢測限可至0.2ng，靈敏度高。外泌體研究工具簡化包裝方案，按需定制規(guī)格，降低包裝物料浪費。

外泌體研究常見問題解答83.外泌體是如何可視化和/或計數(shù)的？外泌體太?。?0–150nm），無法使用常規(guī)顯微鏡觀察，因為這于大小至少為幾微米的物體。光學顯微鏡的分辨率太低，無法觀察外泌體。外泌體大小分布的典型分析方法包括納米粒子跟蹤分析（NTA）、納米流式和電子顯微鏡。盡管在方法上非常不同，但這些技術都允許你研究尺寸低至10納米的納米顆粒。要確定樣本中外泌體的濃度，可以使用NTA、納米流式。它們通過不同的原理對納米顆粒（10–1000nm）進行計數(shù)和粒徑測定。NTA可能是獲得溶液中顆粒平均尺寸和濃度信息的常用方法。然而，這種方法無法區(qū)分大小相同的囊泡和蛋白質聚集體。因此，我們建議將這種方法與顯微鏡技術相結合，以驗證膜的存在。4.外泌體電鏡是不是一定要有膜結構，無膜結構的球體是外泌體嗎？負染電鏡結果中外泌體的形態(tài)肯定是那種明顯的茶托樣或者大餅樣的！邊緣有一圈略微更明亮的亮圈。如果你打到的結構是沒有膜結構的圓球形，那么您很可能看到了脂蛋白顆?；蛘弑F的蛋白質。外泌體研究工具標準化套裝，涵蓋提取到檢測全流程，提升實驗效率。細菌胞外囊泡靶向修飾

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維思克思的外泌體濃縮方案-超濾管02超濾管超濾。超濾濃縮是一種常用的分離技術，利用超濾膜對組分進行分離。溶液通過超濾膜，利用膜孔的大小選擇性，將分子量較大的物質過濾出來，而將分子量較小的物質通過膜孔。本產(chǎn)品基于低蛋白吸附的過濾膜，根據(jù)膜的大小規(guī)格以達到樣本濃縮或分離的效果。具有操作簡單，離心時間短，回收率高等特點?？捎糜谏飿悠窛饪s，分離，蛋白除雜等領域。使用方法：1.樣本澄清通過膜過濾樣本，使樣本澄清，去除雜質。2.超濾管平衡超濾管中加入適量PBS，在轉子中離心。移去裝置底部PBS。3.樣品超濾向超濾管中加入5ml樣品，離心。棄除收集管中液體，回收濃縮樣品。高質量Extracellular Vesicles定制生產(chǎn)

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