外泌體研究常見問題解答145.外泌體RT-qPCR實(shí)驗(yàn)是選擇哪個(gè)靶標(biāo)作為內(nèi)參？外泌體沒有公認(rèn)內(nèi)參，理由如上。常規(guī)內(nèi)參基因在外泌體中表達(dá)量甚至可能比目標(biāo)基因還低。外參是在沒有合適內(nèi)參的情況下的替代物。miRNA檢測外參是化學(xué)合成的線蟲短片段單鏈RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均無同源片段，比較大限度降低了對定量實(shí)驗(yàn)造成的干擾。6.外泌體SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)，樣本量有什么要求？腫瘤細(xì)胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量。某些細(xì)胞（如懸浮細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等）中外泌體含量比較低，建議使用100mL的初始樣品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA，才可以用于SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)。7.如何確保外泌體RT-qPCR和SmallRNA-seq實(shí)驗(yàn)的成功率？為了保證轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)的成功率，建議對提取的外泌體RNA進(jìn)行質(zhì)控，確保RNA質(zhì)量。如檢測RNA的濃度、純度和片段分布等，但由于外泌體RNA含量較低，建議使用商業(yè)的外泌體RNA質(zhì)控試劑盒對RNA質(zhì)量進(jìn)行評估。外泌體研究工具高純度提取試劑盒，減少雜質(zhì)干擾，提升實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。靈芝sEVs鑒定

氯仿買不到？維思克思包有的Trizol法提取RNA是生物實(shí)驗(yàn)中常用的RNA提取方法，然而使用該方法也伴隨著不少困擾。比如，氯仿屬于管制試劑，難以購買！比如，氯仿屬于劇毒試劑，使用時(shí)氣味十分難聞！如果你也遇到以上問題，為什么不選擇一款更安全、更環(huán)保、使用效果和氯仿相同的氯仿替代物呢？產(chǎn)品特點(diǎn)：安全環(huán)保，購買方便；傳統(tǒng)抽提試劑氯仿屬于危險(xiǎn)化學(xué)品，可引起急性中毒以及致。本產(chǎn)品與氯仿相比毒性更小，更安全、環(huán)保；分層效果明顯，本產(chǎn)品有更強(qiáng)的疏水性，水相分層更為明顯，易于吸取，手殘黨友好；RNA質(zhì)量和得率無差別，提取出的RNA得率及質(zhì)量與氯仿提取出的五明顯差異，可完全替代氯仿；用量小，一瓶更耐用，相較于氯仿，本品抽提RNA時(shí)，操作步驟相同，但用量為氯仿的一半，更耐用；適用范圍廣，可適用于各種動(dòng)植物細(xì)胞、組織以及微生物樣本的RNA提取。產(chǎn)品信息：RNAExtractionAgent（WZ13）?？蒲杏肊xosome臨床試驗(yàn)外泌體研究工具低損耗設(shè)計(jì)，試劑利用率高，減少實(shí)驗(yàn)成本浪費(fèi)。

外泌體表征系列產(chǎn)品線目前外泌體缺乏有效的定量和表征方法，單一的檢測技術(shù)都有其局限性。維思克思全新系列產(chǎn)品—外泌體表征與定量試劑盒，該系列產(chǎn)品可對現(xiàn)有單一表征與定量方法進(jìn)行補(bǔ)充，通過多維度對分離出的外泌體進(jìn)行評估，使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更加科學(xué)、準(zhǔn)確。01BCA蛋白定量試劑盒（WSR0022），具有靈敏度高、顯色速度快、線性范圍廣的優(yōu)勢，可高效快速實(shí)現(xiàn)蛋白定量。02脂質(zhì)定量試劑盒(WSR0028/WSR0028-2)，現(xiàn)有的脂質(zhì)定量方法大都需要昂貴的儀器，本產(chǎn)品可代替大型儀器，實(shí)現(xiàn)小成本快速檢測，具有靈敏度高、操作簡便、線性范圍廣等優(yōu)勢。03外泌體RNAQC試劑盒（WSR0013-1），經(jīng)大量研究分析，篩選出2個(gè)陽性外泌體RNA靶標(biāo)和1個(gè)陰性靶標(biāo)，用于表征RNA質(zhì)量。04外泌體蛋白標(biāo)志物鑒定試劑盒（WSR0030），針對外泌體標(biāo)志蛋白CD9、CD81、TSG101、Calnexin檢測而研發(fā)的一款方便高效的試劑盒產(chǎn)品，可監(jiān)測實(shí)驗(yàn)體系并準(zhǔn)確檢測到外泌體中的以上蛋白。05外泌體RNA定量試劑盒（WSR0039），檢測線性范圍是0-25ng，比較低檢測限可至0.2ng，靈敏度高。

外泌體定量和表征。研究外泌體的同行們（包括我）一直被外泌體的定量和表征所困擾，什么樣的外泌體才是好的外泌體呢？是評估其活性？純度？蛋白濃度？還是其他什么指標(biāo)？或者說我們在做實(shí)驗(yàn)時(shí)，怎樣對外泌體進(jìn)行定量呢？這個(gè)可以說是進(jìn)行外泌體實(shí)驗(yàn)的第一步，必須確定外泌體的量，才好判斷實(shí)驗(yàn)變量是否影響外泌體的發(fā)生或者確定下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。你們是如何進(jìn)行定量的呢？目前的外泌體定量方法有以下幾種，分別是：納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、表面標(biāo)志物的ELISA定量試劑盒、BCA或Bradford蛋白定量試劑盒。注：受認(rèn)知所限，有沒有涵蓋的，歡迎補(bǔ)充。上述外泌體定量方法中，以BCA蛋白濃度測定應(yīng)用的廣，也容易得到（也就是可及性很高）。但是，但是我們分離的外泌體，因獲取樣本的不一致，每種樣本中雜蛋白的含量不盡相同，同時(shí)分離方法也不一定相同，這就導(dǎo)致我們很難確定蛋白量與外泌體量的對應(yīng)關(guān)系。所以，我們這些外泌體研究者就在兩難之間不斷橫跳。為了解決這些困境，維思克思生物科技提供了整套外泌體鑒定技術(shù)服務(wù)、外泌體分離、示蹤、保存、游離染料清qing除、蛋白定量、脂質(zhì)定量、核酸定量等系列產(chǎn)品。外泌體研究工具原料溯源體系完善，保障產(chǎn)品質(zhì)量可追溯，降低風(fēng)險(xiǎn)。

外泌體作為近幾年的“科研新貴”，可謂是紅極一時(shí)。由于它們具有獨(dú)特的遷移、靶向和選擇性內(nèi)化進(jìn)入特定細(xì)胞的能力，是非常有前途的遞送載體。然而，目前在外泌體研究和應(yīng)用上還存在以下痛點(diǎn)：痛點(diǎn)一：由于目前對這些內(nèi)源性囊泡了解還不夠深入，尤其是在體內(nèi)行為方面上，將外泌體治zhi療轉(zhuǎn)診至臨床故而仍為一大難點(diǎn)。體內(nèi)追蹤外泌體可以提供有關(guān)其生物分布、遷移能力、毒性、生物學(xué)的重要知識角色，溝通能力和行動(dòng)機(jī)制。痛點(diǎn)二：目前對于胞外囊泡的標(biāo)記方法有很多種，包括親脂性的染料(如PKH系列、Dil系列)，然而這些染料標(biāo)記方法存在一些不足。維思克思的示蹤探針基于兩項(xiàng)發(fā)明專利，對比其他染色方法，該探針具有低背景、高效率、強(qiáng)耐酸的優(yōu)勢！發(fā)明名稱：1.一種pH敏感型探針分子及其應(yīng)用；2.一種探針分子的合成方法。WSR0001-2工作原理為共價(jià)方式嵌入外泌體膜結(jié)構(gòu)。當(dāng)染料結(jié)合外泌體膜后，可通過熒光顯微鏡準(zhǔn)確觀察到外泌體在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)動(dòng)與行蹤。突出優(yōu)勢：特異性高，無背景干擾；標(biāo)記效率高，該探針以共價(jià)的方式嵌入胞外囊泡的雙層膜結(jié)構(gòu)，優(yōu)于親脂性染料，避免自組裝形成的納米粒子造成信號干擾。在低pH（酸性）條件下也可顯色。外泌體研究工具穩(wěn)定批次生產(chǎn)，確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性，降低結(jié)果波動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)。性價(jià)比外泌體熒光染料

外泌體研究工具長效穩(wěn)定配方，延長有效期，減少試劑過期浪費(fèi)。靈芝sEVs鑒定

外泌體研究常見問題解答51.外泌體樣品如何保存？長期保存，置于-80℃。凍存前，離心去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片，再將樣品分裝保存在-80℃。如果條件允許，建議用新鮮樣品進(jìn)行外泌體的分離和后續(xù)實(shí)驗(yàn)。短期保存（1-2天），置于4℃（確保無菌）。2.分離的外泌體如何保存？（1）使用低吸附離心管或凍存管，減少外泌體粘附。（2）對于短期而言，外泌體可以在4°C下儲存長達(dá)1周。對于長期儲存，外泌體可以在-20°C或-80°C下儲存。當(dāng)長期儲存外泌體時(shí)，重要的是要考慮它們是否需要多次解凍。如果需要多次應(yīng)用（因此需要多次解凍）進(jìn)行分析，我們建議將外泌體懸浮液等分到多個(gè)試管中，以便每個(gè)試管只經(jīng)歷一個(gè)冷凍/解凍循環(huán)。多次凍融循環(huán)會對外泌體造成損傷并減少其數(shù)量。靈芝sEVs鑒定

維思克思生物科技(武漢)有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念，先進(jìn)的管理經(jīng)驗(yàn)，在發(fā)展過程中不斷完善自己，要求自己，不斷創(chuàng)新，時(shí)刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司，在湖北省等地區(qū)的機(jī)械及行業(yè)設(shè)備中匯聚了大量的人脈以及**，在業(yè)界也收獲了很多良好的評價(jià)，這些都源自于自身的努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果，這些評價(jià)對我們而言是比較好的前進(jìn)動(dòng)力，也促使我們在以后的道路上保持奮發(fā)圖強(qiáng)、一往無前的進(jìn)取創(chuàng)新精神，努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個(gè)新高度，在全體員工共同努力之下，全力拼搏將共同維思克思生物科技供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來，創(chuàng)造更有價(jià)值的產(chǎn)品，我們將以更好的狀態(tài)，更認(rèn)真的態(tài)度，更飽滿的精力去創(chuàng)造，去拼搏，去努力，讓我們一起更好更快的成長！